小伙伴们都知道做 PCR 实验经常要用到预混液，以前咱们都得自己加蓝色 Loading Buffer 来显色，现在好多厂家直接把染料混进 MasterMix 里，这看起来挺方便，可到底会不会影响 DNA 扩增结果呢？咱们今天就好好唠唠。 以前的 Loading Buffer 主要有三件套功能：首先得用 SDS 或者 EDTA 把酶给“掐死”，终止反应；然后加甘油让 DNA 片段沉底好点样；最后用溴酚蓝染个色。这些成分其实都在《分子克隆》书里写着呢，没什么神秘的。大多数研究认为低浓度染料对酶活性没啥大影响，但如果你想直接拿产物做酶切，还是得查一下这个染料对限制酶有没有副作用。 常用的指示剂颜色大家记不清的话可以看这个图，蓝色对应溴酚蓝，红色是二甲苯青，还有黄色、橙色各种颜色都有对应的口诀。不过要注意的是不同染料在琼脂糖凝胶里跑电泳的速度不一样，这跟你用的电泳液是 TAE 还是 TBE 还有胶的浓度都有关系。想知道条带大概是多少 bp 吗？上百度或维基百科搜标准曲线就行，没必要死记硬背。 最有意思的是甲酚红这个家伙，它其实是 pH 指示剂。PCR 缓冲液里的 Tris 随着温度变化 pH 会变，所以等到 72℃延伸结束你一拿出来看，紫红色管子可能变成了黄色；等温度降下来它又变回紫红了。这要是旁边的小伙伴没看见这出“变色戏法”，很容易以为是管子变质了。其实遇到这种情况别急着换批号，把温度降回室温再看一眼就能复原了。 最后记住三点就够了：第一，低浓度染料通常不影响酶活性；第二，不同颜色迁移率不一样，得选对电泳液和胶浓度；第三，甲酚红会“变脸”，高温后变色很正常。把这三句话刻在脑子里，下次看到五颜六色的 PCR 管就不用紧张咯！