当我们把传统的ADC制备方法与最新的GlyCLICK技术做对比时，就能发现巨大的不同。以往化学偶联往往导致药物抗体比率（DAR）不均一、抗体活性受损，并且因为脱靶效应的存在，疗效大打折扣。人IgG抗体Fc段的N297位糖基成为解决这一痛点的关键，它在Fc结构域中间的位置既远离抗原结合位点，又有着独特的化学性质。科学家们围绕这个靶点发展出了多种糖基偶联技术。第一种方法是通过氧化反应或引入巯基修饰岩藻糖，第二种是在唾液酸上进行酶促修饰和氧化偶联，第三种是用工程化的半乳糖基转移酶（GalT）连接修饰后的半乳糖，而这第四种，也就是GlyCLICK技术的核心所在，它针对的是核心的GlcNAc。 GlyCLICK技术之所以能实现精确的药物连接，得益于它把两步酶促反应和无铜点击化学（SPAAC）结合起来。首先是利用Immobilized GlycINATOR内切糖苷酶（EndoS）切掉天然糖基，把核心GlcNAc暴露出来。这个酶可以处理所有类型的IgG亚类，脱糖基效率高达100%，而且抗体的整体结构不会被破坏。接下来是通过工程化的半乳糖基转移酶GalT (Y289L)，把带有叠氮基团（GalNAz）的半乳糖类似物转移到GlcNAc上。这一步让抗体获得了专属的“标签”，为后续的偶联做准备。最后一步是使用SPAAC让带有叠氮基团的抗体和环辛炔修饰的药物发生反应。这个过程不需要铜离子参与，避免了对生物分子的毒性，反应条件温和且具有高度特异性。最终得到的ADC在Fc区的两个位点定点偶联，DAR精准控制在2.0，完全没有杂化产物。 这种技术带来了显著的优势。它保证了ADC的高度均一性，通过疏水相互作用色谱（HIC）检测可以看到只有一个单一均一峰。SPR分析也证实了偶联后的ADC保留了亲本抗体的抗原结合能力。比如曲妥珠单抗的亲和力只有轻微变化（KD从1.33 nM变为1.52 nM）。另外，这种修饰破坏了Fc与Fc-γ受体的相互作用，降低了脱靶效应，同时又保留了与FcRn的结合能力，维持了正常的体内循环半衰期。实验证明用这种方法制备的抗uPARAP抗体偶联PBD二聚体毒素的ADC具有高效的抗肿瘤活性。在体外可以杀死肿瘤细胞并对肉瘤患者原代样本有效，而在体内仅需2 mg/kg单剂量就能治愈荷瘤小鼠。