别小看那0.1%的漂移率，也别小看那10%的能量掉值，更别小看那20%的柱压上限，它们是决定仪器能否稳定运行的关键。做HPLC其实并不简单，哪怕老手也容易偷懒。泵头里的单向阀如果有了灰尘，反复磨损就会给柱子带来损伤，所以流动相先用玻璃容器蒸馏，再用0.2微米或0.45微米滤膜过滤。如果流动相走空，泵的柱塞会干转把密封环搞坏。关机前要把流速降到最低，然后关闭泵来延长寿命。遇到空转报错的情况，先打开泄压阀用5毫升每分钟的大流量冲走气泡。压力不稳定时先检查是否有气泡藏在单向阀、砂滤棒或者泵头里。 梯度洗脱看似甜蜜实则风险很大。磷酸盐缓冲液和有机溶剂混用时容易析出盐来，配比表上的数值一点都不能省。每一批新溶剂都要跑空白梯度把杂质峰揪出来再进样。甲醇和水的比例为50比50时柱压会翻倍，提前把压力上限调高20%是个好办法。 色谱柱非常娇气。流速突变时柱压会飙升，要慢慢调节流速且温度变化控制在每分钟5摄氏度以内。反冲柱子除非说明书上写着可以反冲，否则一次就能让柱效减半。键合硅胶柱前面最好加上硅胶预柱来先把流动相“饱和”。生物样品一定要上保护柱并且每个月换一次。 仪器买回来只是个开始。新仪器要先过IQ、OQ和PQ这三关，再送去省级检定，半年一次内部校验来保证漂移率不超过0.1%才算合格。流动相的水质要达到18.2兆欧每厘米；试剂必须是色谱纯的。检测波长除了看UV外还要盯着ELSD和FLD的能量条；氘灯用了800小时后能量掉10%就得换灯了。流速1毫升每分钟是默认值，改动它需要写验证报告才行；自动进样器的进样量一般不超过5微升就可以了。 操作人员必须把说明书背到能默写的程度。从过滤、脱气到密封垫清洗再到关机顺序都要写进SOP里签字确认；样品配制最好由专人负责一条线来减少偶然误差。色谱仪得放在水平的台子上并且远离空调风口；数据工作站最好物理隔离一下环境的基线噪音不能超过10的负6次方AU才算达标。