咱们来讲一种特别好用的递送工具,叫OPSS-PEG-Poly-Arginines,专门用来送那些进不了细胞膜的大分子,像siRNA或者蛋白什么的。 这家供应商是西安凯新生物科技有限公司。纯度很高,给的是大于等于95%的,卖相是固态粉末或者颗粒。不管是放在水里还是部分有机溶剂里都能溶解。得在-20℃以下冰冻保存,最好别让它反复冻融。有1g、5g、10g的包装可选。 这东西本身没啥颜色,不算荧光染料。它厉害的地方在于利用那个带正电的聚精氨酸,能把那些荧光探针主动送进细胞里。这就比普通的孵育染料方便多了,像染核用的DAPI都是被动扩散的。要是想看看某大分子在细胞里是咋干活的或者在哪儿呆着,拿它当载体准没错。 具体操作是这样:先把带负电的货物(像Cy3-siRNA、带负电的蛋白)和这东西混合,靠静电吸附包成个纳米颗粒。再把这个复合物加到细胞里头去。观察的时候要是看到荧光散得很开,说明进到了胞质里;要是像个小点似的聚在一块儿,那多半还在装着它的内体里没逃出来。 这就有个问题:OPSS这个基团对还原剂特敏感。要是你的实验体系里有DTT、β-巯基乙醇或者GSH这些东西,它很容易就断掉了。如果只是单纯想看荧光信号(Poly-Arginines本身就能进细胞),断不断也没啥关系;但如果你想用它把别的东西锚定在表面上(比如做偶联),那就惨了,二硫键一断整个分子都掉下来了。所以得先搞清楚自己到底是想干嘛。 还有个事儿得注意:这个多聚精氨酸带的正电荷太密了。浓度太高(通常超过20到50微摩尔)会伤细胞膜。建议先做个浓度梯度实验测测安全性。最好的状态是细胞形态还不错的同时能看到很强的荧光。 为了帮助你们弄明白这一套,我再把那些相关的试剂名称列出来:Biotin-PEG5-NHS ester、Biotin-PEG20-NHS ester、Bis-PEG8-NHS ester、Bis-PEG12-NHS ester、HO-PEG-PtBA、HO-PEG-Sodium AlginateIA-DNP-PEG-NHS、IA-PEG-Mesylate、Biotin-PEG6-Silane、Biotin-PEG24-NHS ester。 最后说一句,这玩意儿只适合做科研实验,千万别用来碰人啊。 (内容由西安凯新生物科技有限公司小M整理完成)