ADP就是给反应里的淀粉链加葡萄糖分子,也顺便弄出个ADP出来。给这里面加了丙酮酸激酶、己糖激酶还有6-磷酸葡萄糖脱氢酶,就能把NADP+变成NADPH了。NADPH多了就说明ADP生成得越多,只要看看340nm下吸光度的变化就能算出SSS活性。这套Soluble starch synthase(SSS)试剂盒是分光光度法的,里头有50管东西。正式测之前得先挑2-3个差别大的样儿来摸摸底。其实SSS就是EC 2.4.1.21,平时像游离的那样在质体基质里转悠,专门管着支链淀粉的合成。 箱子里的东西要这样存:常规的液态试剂像酶工作液、显色剂这些放在2到8度冷藏,离冰箱冷气口远点免得结冰。活性高的东西比如酶制剂、抗体和标准品母液,得放-20度冷冻,最好分装了用一次拿一次别反复冻融。那些稀罕的稀有酶、荧光标记物要扔-80度超低温长期锁着。干粉和稀释液就给它们个15到25度的室温就行,别放太热的地方。 还要看东西喜不喜欢光:酶、荧光探针和还原性底物这些怕光的得放棕色瓶或者避光袋里,别晒太阳也别让强光直射。 防潮防污染也得注意:干粉存的时候湿度最好别超过60%,放点干燥剂在旁边吸吸水气。试剂一开封赶紧盖严实了防氧化防细菌;不同箱子里的东西要分开放千万别混到一起。标准品和质控品得跟核心试剂搁一块儿存;配套的包被板要密封好冷藏着,涂层掉了就不好用了。 最后算数据的时候先把标准品和样本复孔的平均值算出来(就是OD值或者荧光强度),把那些偏差超过10%的异常值踢掉不要。然后拿标准品和样本的平均值减去空白对照的平均值,这才是校正后的信号值。在标准曲线上横坐标填标准品浓度,纵坐标写校正信号值,弄个线性回归方程Y=aX+b出来看看拟合得咋样。相关系数R2得大于等于0.99才行,要不然就得重新来过。 具体怎么算浓度或者酶活类的结果就不用细说了。这套东西只有科研实验才能用哈。