做微生物实验,第一步得是灭菌。器材灭菌这事没弄好,后面的实验能不能成,很多时候就在打开灭菌柜门的那一刻定了。不管是玻璃、金属还是橡胶、塑料,每种器材都得有专门的“办法”去处理。只要把物理手段和化学手段搭配对路,污染率自然能降下来。 灭菌的手段其实就两大类:物理的和化学的。物理灭菌主要是通过把微生物给“弄干”或者是用射线把它们打成渣渣。比如干热灭菌,温度控制在120到150度之间,连续烘上90到120分钟,像玻璃和金属这些不怕水的器材就能扛住。平常在酒精灯上用火焰给镊子尖消毒,其实也是干热灭菌的一种。湿热灭菌则是用高压蒸汽,1.0到1.1 kg/cm²的压力下蒸20到30分钟,就能把蛋白质凝固掉。像布类、胶塞还有培养液这些,在高压锅里蒸一蒸也就没问题了。紫外线灯照30分钟能把空气里的DNA打断,不过人要马上撤出来,还有培养物不能直接盯着看。过滤除菌用的是0.22到0.45微米的滤膜,细菌和孢子都被拦住了,这样酶液和血清就不用高温加热也能安全使用了。 化学消毒呢,主要是用来弥补物理方法管不到的地方。75%的乙醇、甲醛加高锰酸钾熏蒸、还有环氧乙烷气体这些都是常用手段。关键是要把浓度、时间和用什么材料对上号,不然要么没效果,要么直接把实验材料给“毒死”。 接下来说说不同的器材该怎么处理。无菌操作室平时要是停久了没用,可以用甲醛加高锰酸钾密闭熏蒸一次;要是平时用的话,每次进去之前先开紫外线灯照30分钟,超净台面再拿酒精擦一遍就妥了。 培养液得特别小心处理。耐热的成分先放进高压锅里121度蒸15到20分钟;不耐热的成分就得用0.22微米的滤膜抽滤一遍。要是把这个顺序搞反了,营养液就报废了。 玻璃或者塑料的器皿也得看情况。玻璃的可以直接进干热箱里烤;塑料怕高温的话就用75%的酒精泡30分钟,再用紫外线补一下;要是用环氧乙烷气体密封袋消毒也行,不过得散气散够4个小时才能用。 金属器械最好用火焰灼烧的办法。镊子和剪刀伸到酒精灯的外焰里烤3秒钟,冷却后拿到无菌操作台再照一次紫外线就行了,整个过程也就30秒就能搞定。 动物组织处理起来稍微麻烦点。先拿10%的过氧化氢泡5分钟、或者是0.05%的过氧乙酸泡30秒、再或者是75%的酒精泡2分钟都行。一定要等表面没有泡沫了才算合格;要是内部已经发黑了就直接扔掉别用了。